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RCEES OpenIR  > 环境化学与生态毒理学国家重点实验室  > 学位论文
题名: 某此锌酶结构的研究
作者: 王云娟
学位类别: 硕士
答辩日期: 1989
授予单位: 中国科学院研究生院
授予地点: 北京
导师: Ivano Bertini
中文摘要:       为了研究超氧化物歧化酶(SOD)和碱性磷酸酶(AP)的结构与功能的关系。本文通过改变PH和金属探针。即通过用金属离子的连续取代制成不同的金属取代酶,并运用多种测试手段。主要以核磁共振(NMR),辅以电子顺磁共振(EPR)。园二色性(CD)和吸收光谱。对金属离子的键合过程,键合位的形成、配位基的情况、以及O_2~-的催化歧化机理进行了研究。实验结果说明本实验的设计是合理的。获得的信息是可靠的。论文第一部分首先在Zn位空缺时,对超氧化物歧化酶(Cu-Zn-SOD)进行研究,结果发现此酶具有Cu(II)的优势键合。这提供了亚基内Zn位和Cu位间离子相同影响的信息。对H_2O_2修饰的SOD研究表明:由H_2O_2引起的修饰并不直接作用于某一特定的氨基酸残基上,而是改变蛋白质的空间构象包括金属的变化。从而使人们对SOD催化O_2~-歧化的作用机理,在分子水平上又有了更深一步的认识。论文第二部分则通过对PH6时Cu_2 Co_2~-、Co_2 Co_2~-、Ni(II)-AP和PH8时(Mg~(2+)存在或不存在条件下)Co(II)-AP体系的比较研究,以认识apoAP对于金属键合行为的复杂性。通过吸收光谱的研究确认了PH6时,apoAP在A位先与Cu~(2+)键合,B位与Co~(2+)键合,Mg~(2+)键合在C位。由磁敏感性的研究知道A位的Cu~(2+)和Co~(2+)为四配位的。B位的Co~(2+)为六配位的。~1H NMR,N~MRD和EPR光谱的研究证明了在Cu_2 Co_2 AP体系中Cu与Co离子之间有磁偶合存在。通过PH8时吸收光谱及~1H~0N~MR光谱对Mg~(2+)不存在的条件下,Co(II)键合行为的研究。确认了Co(II)对apoAP的键合是一种随机的方式。说明apoAP活性中心的结构没有秩序,配位的金属位预先并未形成。这一结果在PH6,Ni(II)-AP体系的研究中得到了证明。PH6和PH8时的研究都证明Mg~(2+)在C位的键合,起到稳定酶结构作用,并使apoAP结构变化得接近天然AP的构象。通过吸收光谱和~1H N_MR光谱的研究进一步证明了PH8时,每二个亚基仅能键合一个磷酸。Ni-AP体系(PH6)的研究还证明在A位Ni(II)为五配位体,B位的Ni(II)为六配位体(B位的键合与Co(II)相同,均为六配位体)本文的研究证明了AP是一个十分复杂的酶,它可以形成多种金属衍生物。并证实在其分子内部的各金属离子间存在着相互作用,从而使我们对AP酶的分子结构及作用机理有进一步的了解。另外,由不同PH值时的各金属离子的键合研究,证实了酶活性中心结构及整个分子的结构直接受到金属离子的影响。这种研究还提供了键合位,配位基的信息。为认识AP结构提供了重要依据。
内容类型: 学位论文
URI标识: http://ir.rcees.ac.cn/handle/311016/34898
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王云娟. 某此锌酶结构的研究[D]. 北京. 中国科学院研究生院. 1989.
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